Банковские реквизиты

КГКУ «Краевая ветеринарная лаборатория»
ИНН 2465083660 КПП 246501001
660020, г. Красноярск, ул. Дудинская 5г
Отделение Красноярск г. Красноярск
УФК по Красноярскому краю (КГКУ "Краевая ветеринарная лаборатория" л/с 04192019690)
БИК 040407001 р/с. 40101810600000010001
ОКПО 74864650
ОГРН 1042402649453
ОКВЭД 85.20 74.30.2
тел./факс: (391) 220-12-87
тел./ИЦ: (391) 220-12-84
тел./лаборатории (391) 220-12-86
тел. бухгалтерии: (391) 220-13-35

Авторизация



Диагностика и методы идентификации этиленгликоля при отравлений животных

КГКУ «Краевая ветеринарная лаборатория», Красноярск

Этиленгликоль-бесцветная сиропообразная, сладковатая жидкость без запаха. Температура кипения 197,4 0С. Хорошо растворяется в спирте, воде, ацетоне, плохо - в эфире и жирах. Водные растворы этиленгликоля замерзают при температуре -65 0С.

Этиленгликоль применяют во многих отраслях промышленности: химической, фармацевтической, парфюмерной, автомобильной, авиационной, электротехнической, текстильной, нефтегазовых и других. В ограниченных масштабах этиленгликоль так же применяют как растворитель печатных и некоторых других красок, в производстве чернил и паст для шариковых ручек, в органическом синтезе.
Одной из основных областей применения этиленгликоля и его производных (целлозольфы, карбитолы) является производство незамерзающих жидкостей - антифризов, тормозных и технических жидкостей.

 

Общий характер токсического действия: Отравление этиленгликолем, как правило, происходит при пероральном приеме. Ингаляционные отравление этиленгликолем из-за малой летучести не встречаются.

 

Токсическое действие этиленгликоля и его эфиров во многом определяется процессами его биотрансформации и токсичностью метаболитов.

Если в первую фазу интоксикации животное удалось спасти, этиленгликоль метаболизируется в печени ферментом алкогольдегидрогеназой с образованием нескольких веществ, вызывающих развитие ацидоза и повреждающих почки. Метаболитами этиленгликоля является гликолевый альдегид, гликолевая кислота, глиоксиловая кислота и щавелевая кислота. Угнетение ЦНС возникает из-за присутствия гликолевого альдегида, который усиливает метаболический ацидоз и анионную разницу. Другие метаболиты ответственны за повреждение почек. Так, щавелевая кислота, взаимодействуя с ионами кальция, образует в почечных канальцах кристаллы оксалата кальция. И хотя повреждения, которые они вызывают, сравнительно невелики, но без соответствующего лечения в течение 1-4 дней развивается анурическая форма острой почечной недостаточности.

В механизме токсического действия этиленгликоля большую роль играют его гидрофильные свойства. Этиленгиколь и продукты его метаболизма являются осмотически активными веществами и вызывают гидропические изменения клеток. Проникая в клетку, молекула этиленгликоля увлекает за собой жидкость, нарушая клеточную структуру вплоть до ее гибели. Возникает резкая гидропическая дистрофия с образованием так называемых клеток-пузырей, что приводит к гибели клеток. Этот процесс наблюдается в эпителии проксимальных отделов почечных канальцев, где происходит реабсорбция жидкости, что является одной из причин развития почечной недостаточности.

Картина отравления: Клиническая картина отравлений этиленгликолем характеризуется фазностью развития патологического процесса, в ней выделяют следующие периоды: начальный (опьянения с возбуждением); скрытый (мнимого благополучия); выраженных проявлений (а - преимущественно мозговых нарушений, б – преимущественно поражения внутренних органов: печени и почек); восстановления и последствий. Начальные проявления напоминают таковые при алкогольной интоксикации: депрессия, атаксия, рвота. К сожалению, такая симптоматика появляется только через несколько часов после приема этиленгликоля и часто остается незамеченной владельцем животного. При достаточно большом количестве принятого внутрь яда в течение последующих 12 ч развиваются полиурия, полидипсия и дегидратация. Это первые симптомы начинающейся олигурической острой почечной недостаточности. У кошек почечная недостаточность возникает в первые 12-24 ч. К неспецифическим проявлениям отравления относятся: изъязвление слизистой оболочки полости рта, гиперсаливация, рвота, олигурия с изостенурией и возникновение в течение 4-х дней анурии. При приеме большого количества этиленгликоля быстро развивается кома, животное погибает в течение нескольких часов в первую очередь из-за угнетающего действия вещества на ЦНС.

Относительно смертельной дозы этиленгликоля в литературе нет единого мнения. Значительное влияние на выраженность токсического эффекта оказывают общее состояние организма и индивидуальные особенности животного. Большинство смертельных отравлений у собак вызывается приемом 4,4-4,6 мл/кг, кошки более чувствительны и смертельная доза для них составляет только 1,4 мл/кг .

В химико-токсикологическом отделе Красноярской Краевой ветеринарной лаборатории проходил случай отравления собаки этиленгликолем.

Из анамнеза: кобель, возраст 3 года; спустя примерно 9 часов после кормления у собаки появились признаки болезни: рвота, миоклонус, атаксия, очаговые конвульсии, ступор, кома и смерть. Как пояснил владелец, вода для приготовления корма для собаки хранилась в канистрах из под антифриза.

Владелец собаки обратился в ветеринарную клинику, где было проведена дезинтоксикационная и симптоматическая терапия (реланиум, магния сульфат, дексаметазон и лазикс). Однако несмотря на лечение смерть животного наступила в течении часа.

После смерти собака была доставлена в ветеринарную лабораторию для установления причин смерти.

При патологоанатомическом вскрытии наблюдалась следующая картина: Острый катарально-геморрагический энтерит кишечника. Печень кровенаполнена, увеличена, на разрезах имела «мускатный» вид, в ней была выражены дистрофия. Увеличение почек, гидропическая дистрофия эпителия извитых канальцев почек, сильное кровенаполнение мозгового слоя (граница между слоями четно выражена). Паралич сердца. Множественные кровоизлияниями в мозг, с сильным кровенаполнением сосудов головного мозга, который приобрел синеватый цвет.

Объекты и методы исследований: Для исследования был отобран патологический материал: почка, печень, желудок с содержимым, моча.

Исследования проводились по общетоксикологическим показателям:

Нами были проведены следующие исследования: реакция с групповым реактивом Драгендорфа при анализе на алкалоиды, реакция на количественное определение повареной соли аргентометрическим методом, исследование на определение нитратов и нитритов фотометрическим методом, качественное и количественное определение этиленгликоля.

Выделение из биологического материала этиленгликоля для качественного определения: метод основан на использовании бензола как селективного переносчика этиленгликоля из объектов в дистиллят. Бензол совместно с парами и небольшим количеством водяного пара переносится в дистиллят. Вода, которая перегоняется при этом, практически содержит весь этиленгликоль. На исследование был отобран желудок с содержимым трупа, в котором после острого отравления содержится больше этиленгликоля, чем в других органах.

К 10 г содержимого желудка прибавляли 5 г кристаллической щавелевой кислоты, смесь растирали до получения однородной кашицы, переносили в круглодонную колбу вместимостью 100 мл и прибавляют 50 мл бензола. Колбу закрывали вертикально поставленным холодильником, снабженным приспособлением для улавливания воды. Затем колбу устанавливали на водяную баню и нагревали. Пары и увлекаемые им вода и этиленгликоль конденсируются в холодильнике и попадают в специальное приспособление. Поскольку в этой насадке бензол (плотностью 0,879) находится сверху воды, он стекает в колбу. Вода и находящийся в ней этиленгликоль остаются в насадке. После окончания отгонки отбирали необходимое для анализа количество дистиллята.

Качественное обнаружение этиленгликоля:

Для обнаружения этиленгликоля применяли цветные и микрокристаллоскопические реакции. Реакция окисления этиленгликоля периодатом и обнаружение образовавшегося формальдегида. Эта реакция основана на окислении этиленгликоля периодатом натрия или калия. В результате указанной реакции образуется формальдегид, который можно обнаружить при помощи фуксинсернистой кислоты.

При выполнении этой реакции избыток ионов иодата и периодата связывали раствором сернистой кислоты, а затем прибавляли фуксинсернистую кислоту. Реакция формальдегида с фуксинсернистой кислотой: К 3—5 мл дистиллята прибавляли 5 капель 12 %-го раствора серной кислоты, 5 капель 5 %-го раствора периодата калия в 5 %-м растворе серной кислоты и взбалтывали. Через 5 мин прибавляли 3—5 капель раствора сернистой кислоты, а затем 4 капли раствора фуксинсернистой кислоты.

Появление красно-фиолетовой или розовой окраска через 3—20 мин свидетельствует о наличии этиленгликоля.

Окисление этиленгликоля азотной кислотой и обнаружение щавелевой кислоты: при многократном выпаривании этиленгликоля с азотной кислотой образуется щавелевая кислота, которая с солями кальция образует кристаллы оксалата кальция, имеющие характерную форму. Эти кристаллы в ряде случаев появляются через 2—3 суток.

Реакция с сульфатом меди: от прибавления сульфата меди и щелочи к этиленгликолю образуется соединение, имеющее синюю окраску: К 2—3 мл исследуемого раствора прибавляли 1—2 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия и несколько капель 10 %-го раствора сульфата меди. Появление голубой окраски указывает на наличие этиленгликоля в растворе.

Выделение из биологического материала этиленгликоля для полуколичественного определения: 20,0 г печени или почек настаивали в ацетоне дважды, объединяли извлечения, прибавляли 0,5 г активированного угля, фильтровали, затем упаривали при 60 0 С до 1-2 мл.

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ): 0,2 мл извлечения наносили на хроматографическую пластину «Сорбфил» в виде точки, последующую каплю наносили после испарения предыдущей. На расстоянии 2 см от точки исследуемого извлечения наносили 0, 02 мл раствора сравнения — этиленгликоля. Пластинку хроматографировали с системе растворителей: хлороформ-ацетон-этанол (4:4:1). Пластинку после хроматографирования высушивали до удаления запаха растворителей и проявляли (последовательно): 0,1 % раствором перйодата калия, после высушивания — 0,1 % раствором бензидина. При наличии этиленгликоля наблюдают пятно белого цвета на серо-синем фоне в области стандарта и исследуемого извлечения. (Rf 0,4)

Метод газовожидкостной хроматографии: 3 мкл извлечения (пробоподготовка как для ТСХ) вводили в газовожидкостный хроматограф «Кристалл-2000». Условия хроматографирования: колонка HP FFAP 50m*0,32mm*0/52mkm, газ-носитель азот, детектор ионизационно-пламенный, Тинжектора=210 0 С, Тдетектора=210 0 С, Тколонки изменяется от 100 0 С до 200 0 С (5 мин-изотерма, затем-со скоростью 15 0 С/мин). Затем идентифицировали пик на хроматограмме.

Результаты исследований:

    1. При анализе на алкалоиды — реакция отрицательна

    2. поваренная соль — 0,1% (данная концентрация не является токсичной)

    3. нитраты менее 0,5 мг/кг

    4. нитриты менее 0,05 мг/кг

    5. при анализе мочи: в осадке были выявлены кристаллы оксалата кальция, в форме шестигранных призм моногидрата оксалата кальция, гипокальциемия, гематурия, протеинурия, уменьшение плотности мочи до 1,012, снижение pH мочи до 4,8.

    6. При качественном определении этиленгликоля:

      6.1 Появление красно-фиолетовой или розовой окраска через 15 мин (реакция формальдегида с фуксинсернистой кислотой).

      6.2 Обнаружение щавелевой кислоты (кристаллы оксалата кальция) реакция с азотной кислотой

      6.3 Реакция с сульфатом меди- появление голубой окраски.

    7. Полуколичественное определение этиленгликоля:

      7.1 При тонкослойной хроматографии - наблюдали пятно белого цвета на серо-синем фоне в области стандарта и исследуемого извлечения. (Rf 0,4)

    8. Количественное определение:

      8.1 При газовожидкостной хроматографии - на хроматограмме пик этиленгликоля идентифицировали (время удержания этиленгликоля 8,68 мин)